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電泳設備中電泳過程中出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象怎么解決？
電泳設備中電泳出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象，英文成為smear，就是彌散。其原因，主要從以下兩個方面考慮：
1、PCR產(chǎn)物自身原因：
往往由于酶量過多或酶的質(zhì)量差，dNTP濃度過高，Mg2+濃度過高，
退火溫度過低，循環(huán)次數(shù)過多，而造成PCR的非特異性產(chǎn)物過多。
對策：
①減少Taq酶的量，或調(diào)換另一來源的酶。
②減少dNTP的濃度。
③適當降低Mg2+濃度。
④增加模板量，減少引物的用量，減少循環(huán)次數(shù)，提高退火溫度。
2、電泳體系的問題：
（1）電泳緩沖液TAE或者TBE的污染，建議更換緩沖液。
（2）上樣時樣品漂了，建議增加上樣緩沖液的用量，以及小心加樣。
（3）電壓太高。
（4）適當把你的膠的濃度加大。（根據(jù)你的片斷大小而定）
（5）觀察你的marker是否也存在拖尾現(xiàn)象，作為對照。
PCR拖尾及假陽性的原因及對策
拖尾現(xiàn)象：產(chǎn)物在凝膠上呈Smear狀態(tài)。
原因：
1.模板不純
2.Buffer不合適
3.退火溫度偏低
4.酶量過多
5.dNTP、Mg2+濃度偏高
6.循環(huán)次數(shù)過多
對策：
1.純化模板
2.更換Buffer
3.適當提高退火溫度
4.適量用酶
5.適當降低dNTP和鎂離子的濃度
6.減少循環(huán)次數(shù)
假陽性
現(xiàn)象：空白對照出現(xiàn)目的擴增產(chǎn)物
原因：
靶序列或擴增產(chǎn)物的交叉污染
對策：
1.操作時應小心輕柔，防止將靶序列吸入加樣槍內(nèi)或濺出離心管外；
2.除酶及不能耐高溫的物質(zhì)外，所有試劑或器材均應高壓消毒。所用離心管及加樣槍頭等均應一次性使用。
3.各種試劑最好先進行分裝，然后低溫貯存
電泳設備運行中出現(xiàn)的問題要及時應對，有因有果，找對方法一定可以很好解決電泳設備中電泳出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象！
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